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介绍有关于下PCR检测试剂盒的操作步骤
发布时间:2020-10-18   点击次数:29次

PCR检测试剂盒是酶免疫测定技能中应用较广的技能。其基本办法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体外表,使酶符号的抗原抗体反响在固相外表进行,用洗刷法将液相中的游离成分洗除。常用ELISA酶联免疫吸附实验,法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。

此种酶符号抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反响。因而,可通过底物的颜色反响来判定有无相应的免疫反响,颜色反响的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反响可通过酶联免疫试剂盒检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反响的敏感性和抗原抗体反响的特异性结合起来,使酶联免疫试剂盒办法成为一种既特异又敏感的检测办法。
 
PCR检测试剂盒操作步骤
1.确认本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2.将倍比稀释的标准品各0.1ml顺次参加一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔参加。
3.酶标板加上盖,37℃反响90分钟。
4.反响后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗刷2次。
5.将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响60分钟。
6.0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次,每次浸泡1分钟左右。
7.将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响30分钟。
8.0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次,每次浸泡1-2分钟左右。
9.按每孔0.1ml顺次参加TMB显色工作液,37℃避光反响,反响过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有显着的梯度蓝色,后3-4孔差别不显着时,即可参加TMB停止液0.1ml/孔。(显色反响不要超过30分钟)。
10.用酶标仪在450nm测定O.D.值。
星图注册11.依据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来核算。应记住由于样品稀释了N倍,其实践浓度应该×N。

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